间充质干细胞属于成体干细胞，，，可在体外通过分歧的步骤过问下下诱导分化为骨、软骨及其他结缔组织，，，因其起源宽泛，，，分离无创伤，，，较低的免疫原性、成长周期短等特点，，，是组织工程种子细胞的重要起源。。 。干细胞的诱导分化一方面是干细胞鉴定的重要步骤，，，另一方面也是干细胞职能学钻研的重要蹊径。。 。选取体外前提造就基诱导造就下，，，人间充质干细胞应可能分化为成脂肪、骨、软骨细胞。。 。成骨分化经茜素红染色法鉴定。。 。
尝试前筹备：：
试剂：：PBS，，，成骨诱导分化造就基，，，茜素红
耗材：：NEST细胞造就皿，，，NEST通常吸头，，，NEST微量离心管
设备：：CO2造就箱，，，显微镜
一、接种骨髓间充质干细胞：：
取对数成持久的细胞，，，依照2×105cells/cm2的细胞密度接种至包被后的细胞造就皿中，，，将接种好的细胞造就皿放到37℃，，，5% CO2细胞造就箱造就，，，定期观察细胞增殖状态，，，当细胞融合度达60-70%时，，，弃掉上清，，，参与成骨诱导分化造就基。。 。
二、细胞分化诱导：：
每2-3天进行换液（定期观察是否有传染），，，再放入37℃，，，5% CO2细胞造就箱中造就约2-3周，，，并把稳观察细胞状态变动。。 。凭据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况，，，决定终止细胞诱导的功夫，，，进行下一步染色鉴定。。 。
三、细胞固定：：
用吸头（确保汲取充分）吸去造就基使用适量1×PBS洗濯一次，，，弃去后取适量4%中性甲醛溶液细胞造就皿底面，，，室温固30-60min，，，弃去固定液再使用1×PBS洗濯两次。。 。
四、茜素红染色：：
参与适量茜素红染液染3-5min，，，吸去茜素红染液，，，用1×PBS洗濯两次，，，并参与适量1×PBS预防细胞干燥。。 。
五、诱导评估：：
显微镜下观察成骨染色成效，，，并进行图像采集和诱导评估。。 。诱导成功时，，，钙质结节会与茜素红染料结合后出现红色或橘红色。。 。
图c 间充质干细胞成骨诱导分化,茜素红染色显示钙结节..
